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分子生物學常用溶液配制

一、分子生物學常用貯存液的配制1．30%丙烯酰胺溶液【配制方法】將29g丙怖酷膠和1gN，N’-亞甲雙丙怖酷膠溶于總體積為60ml的水中。加熱至37校溶解之，補加水至終體積為100ml。用濾器（0.45μm孔徑）過濾除菌，查證該溶液的pH值應不大于7.0，置棕色瓶中保存于室溫。【注意】丙怖酷膠具有很強的神經毒性并可以通過皮膚吸收，其作用具累積性。稱量丙怖酷膠和亞甲雙丙怖酷膠時應戴手套和面具。可認為聚丙怖酷膠無毒，但也應謹慎操作，因為它還可能會含有少量未聚合材料。一些價格較低的...

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SDS-PAGE 膠染色介紹

一、各種蛋白染色方法的靈敏度比較二、考馬斯亮藍染色CBB染色液0.5%考馬斯亮藍G250或R25040%甲醇10%乙酸將CBB溶于甲醇中并不停的攪拌15min。加入乙酸與ddH2O脫色液：30%甲醇10%乙酸染色方法：1.在搖床上染色30min.2.脫色至蛋白點或條帶清晰可見3.ddH2O洗3-5次三、膠體考馬氏亮藍染色ColloidalCoomassieStaining（Cambridgecentreforporteomics）sensitivity=~100ng1.固定：...

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雙向電泳的樣品的制備及電泳實驗步驟

樣品制備原則樣品制備是雙向電泳中最關鍵的一步，將直接影響2-DE結果好壞。目前并沒有一個通用的樣品制備方法，盡管處理方法多種多樣，但都遵循幾個基本的原則：1）盡可能的提高樣品蛋白的溶解度，抽提最大量的總蛋白，減少蛋白質的損失；2）減少對蛋白質的人為修飾；3）破壞蛋白質與其他生物大分子的相互作用，并使蛋白質處于變性狀態。根據這一原則，樣品制備需要四種主要的試劑：離液劑(chaotropes),主要包括尿素（Urea）和硫脲（thiourea）；表面活性劑（sufactants）...

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免疫熒光標記法

免疫熒光標記法1、細胞膜上的免疫熒光檢測法間接標記法1)制備單細胞懸液；2)細胞計數，取出1×106個細胞于試管中；3)用臺盼藍染色計活細胞數，要求活細胞數90～95%；4)在試管中加入一抗，（劑量按照說明書的要求），孵育30～60分鐘；5)PBS洗滌1～2次，1500rpm，離心3分鐘，棄上清；6)加入二抗，孵育20～30分鐘；7)PBS洗一次，1500rpm，離心3分鐘，棄上清;8)加300μlPBS，上機檢測(若不能及時上機檢測，可加1ml1%多聚甲醛固定，可放置1周)...

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細胞凋亡檢測及分子生物學檢測步驟

細胞凋亡檢測及分子生物學檢測步驟：1、細胞DNA含量分布（由細胞DNA降解方式檢測細胞凋亡）收集已固定的單細胞懸液約5×105~1×106/ml；離心除去固定液，3mlPBS重懸細胞;使用低速離心機1500rpm離心，5分鐘，棄去PBS；加PI染液1ml，室溫避光20分鐘；調整細胞濃度5×105/ml；上機檢測。2、磷脂酰絲氨酸外翻分析檢測細胞凋亡1)常規制備單細胞懸液,用PBS洗兩次.(若為全血要先溶血),取約5×106個細胞，1500rpm離心,棄上清,用400μl1×B...

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